Bagaimana cara menghindari kesalahpahaman umum dalam penggunaan tip pipet yang mengikat rendah?

Tip pipet pengikat rendah Dapat secara signifikan mengurangi residu sampel karena desain permukaan bagian dalam hidrofobik, dan sangat cocok untuk menangani reagen yang mahal, cairan kental atau sampel jejak (seperti protein dan asam nukleat). Namun, jika mereka tidak dioperasikan dengan benar, mereka mungkin masih mempengaruhi keakuratan dan pengulangan percobaan. Berikut ini adalah analisis kesalahan dan solusi umum yang digunakan dalam kombinasi dengan spesifikasi operasi laboratorium:

Kesalahpahaman 1: Mengabaikan pra-basa-basi

Operasi yang salah: Secara langsung aspirasi sampel dan menghilangkan langkah pra-perendah.

Dampak: Meskipun ujung pipet pengikat rendah dapat mengurangi residu, untuk sampel seperti serum, protein atau pelarut organik, dinding bagian dalamnya mungkin masih membentuk film mikro-cair karena tegangan permukaan, menghasilkan volume pipeting awal yang rendah.

Pendekatan yang Benar: Sebelum pemipaan formal, ulangi aspirasi-discharge 2 hingga 3 kali dengan sampel yang sama untuk membentuk lapisan film cair yang stabil di dinding bagian dalam ujung (kecuali untuk cairan suhu tinggi/suhu rendah).

Kesalahpahaman 2: Kecepatan aspirasi terlalu cepat atau sudutnya dimiringkan

Operasi yang salah: Aspirasi cairan dengan cepat atau pipet dimiringkan lebih dari 20 °.
Dampak:

Pipet Terlalu Cepat: Gelembung atau Pengisapan Kembali (cairan bergegas ke dalam pipet dan mencemari piston);
Pipet dimiringkan: Mengubah tekanan permukaan cair, menghasilkan volume pipet yang tidak akurat dan peningkatan volume residual. Pendekatan yang Benar:
Pipet perlahan dan lepaskan perlahan: beroperasi dengan kecepatan konstan dan mengontrol kecepatan pelepasan piston;
Tahan secara vertikal: Jaga agar sudut kemiringan ≤20 ° saat ujung pipet direndam dalam permukaan cair.
Kesalahpahaman 3: Mengabaikan perbedaan operasional cairan kental
Operasi yang salah: Gunakan kecepatan pemipaan yang sama dengan cairan biasa untuk sampel viskositas tinggi (seperti gliserol dan suspensi sel).
Dampak: Cairan kental mengalir perlahan di dinding bagian dalam ujung pipet, dan debit yang cepat akan menyebabkan peningkatan volume residual yang signifikan, mengimbangi keuntungan dari desain adsorpsi yang rendah.
Pendekatan yang Benar:

Perpanjang waktu perendaman: Tetap di permukaan cair selama 1 detik setelah aspirasi sebelum melepasnya, dan jeda selama 1 detik sebelum menekan gigi kedua untuk meniup cairan saat keluar;
Pilih ujung pipet mulut lebar: Untuk makromolekul atau sampel sel, gunakan ujung pipet adsorpsi rendah mulut lebar (70% lebih besar dari aperture standar) untuk mengurangi gaya geser.
Kesalahpahaman 4: memukul keras saat memasang tip
Operasi yang salah: berulang kali memukul pegangan pipet untuk "mengencangkan" tip.
Efek: Dampak jangka panjang akan memakai komponen penyegelan pipet, menghancurkan kedap udara, dan menyebabkan kesalahan bocor atau volume.
Metode yang benar: Masukkan pipet secara vertikal ke ujung, tekan ringan, dan sedikit putar kiri dan kanan agar pas.

Kesalahpahaman 5: Penyimpanan atau penggunaan kembali yang salah
Operasi yang salah:

Letakkan pipetnya datar saat ada cairan residu di ujungnya;
Gunakan kembali kiat adsorpsi rendah sekali pakai untuk menghemat biaya. Dampak:
Menempatkan datar penyebab backflow cairan untuk mengoreksi pegas piston;
Penggunaan kembali dapat mempengaruhi akurasi karena kontaminasi silang atau deformasi struktural. Metode yang benar:
Buang ujungnya segera setelah pemipaan, dan gantung pipet secara vertikal;
Penggunaan kembali dilarang keras, terutama ketika datang ke eksperimen sensitif seperti PCR dan isotop.
Saran Profesional: Memaksimalkan Keuntungan Tips Retensi Rendah
Cocokkan sifat cairan:
Cairan yang mudah menguap (seperti kloroform): Hindari menggunakan tips retensi rendah biasa dan gunakan ujung pelarut-aman atau pipet piston eksternal yang dirancang untuk reagen volatil.
Verifikasi kalibrasi:
Secara teratur menimbang berat air murni yang dipipet dengan keseimbangan analitik (1ml = 0,9982g pada 20 ℃) ​​untuk memverifikasi apakah volume aktual memenuhi standar.
Ringkasan Poin Kunci: Tip retensi rendah meningkatkan akurasi dengan mengurangi kehilangan sampel, tetapi jika rincian operasi diabaikan, itu mungkin masih kontraproduktif. Instalasi standar, kontrol kecepatan, adaptasi terhadap karakteristik sampel dan penggunaan satu kali yang ketat adalah dasar untuk mencapai percobaan pengulangan yang tinggi.